U-Blot® PVDF 印跡膜（0.2 μm）是一種聚偏氟乙烯 (PVDF) 微孔膜，用于從各種凝膠基質(zhì)中轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)。與硝酸纖維素膜相比，它具有更佳的操作性能。

這款疏水膜有兩種孔徑：0.45μm 和 0.2μm，使其能夠結(jié)合各種分子量范圍的蛋白質(zhì)：

• 0.45μm孔徑：適用于大多數(shù)蛋白質(zhì)，提供更高的檢測(cè)靈敏度。

• 0.2μm孔徑：適用于分子量小于20,000的蛋白質(zhì)，確保更好地吸附和保留小分子蛋白質(zhì)。

U-Blot® PVDF印跡膜具有出色的蛋白質(zhì)保留性、高物理強(qiáng)度和廣泛的化學(xué)相容性，使其成為免疫測(cè)定的選擇。

U-Blot® PVDF 印跡膜（0.2 μm）

1. 用SDS PAGE凝膠分離蛋白質(zhì)樣品和蛋白Marker。

2. 小心地裁切和放置凝膠，并將凝膠在冷轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡5~20分鐘。

3. 將膜和濾紙切成適合凝膠的尺寸。將PVDF膜在甲醇中預(yù)濕20秒，直至其從不透明的白色變?yōu)榫鶆虻陌胪该骰疑缓蠼菰诔兯?-2分鐘，去除試劑殘留；隨后在冷轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡2-3分鐘，直至可以使用。

使用提醒：

膜潤(rùn)濕后，請(qǐng)勿使其變干。如果膜部分變干（變成不透明的白色），也必須重新潤(rùn)濕。

4. 依次組裝轉(zhuǎn)印裝置，轉(zhuǎn)印夾子→海綿墊→濾紙→預(yù)濕的膜→裁切好并預(yù)濕的凝膠→濾紙→海綿墊→轉(zhuǎn)印夾子，每放置一層要注意避免起皺、折疊或存在氣泡（可利用切膠板等工具輕輕趕壓氣泡，使每層緊密貼合）

5. 按照所用轉(zhuǎn)印裝置說(shuō)明設(shè)置運(yùn)行條件等，開(kāi)始轉(zhuǎn)印。

6. 轉(zhuǎn)印結(jié)束后，取出印跡膜，并在超純水中短暫沖洗去除凝膠碎屑。印跡膜可以風(fēng)干儲(chǔ)存，也可以立即使用用于免疫檢測(cè)步驟。

成功進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)的一些關(guān)鍵因素，例如蛋白質(zhì)濃度、封閉液和抗體濃度，可能需要在以下方案中進(jìn)行優(yōu)化。

標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)

1. 如果印跡膜已干，請(qǐng)將其重新浸濕，浸泡在甲醇中 15 秒，或直至其顏色從不透明的白色變?yōu)榘胪该鞯幕疑?/span>

2. 用超純水沖洗印跡膜 1 分鐘。

3. 將印跡膜放入封閉緩沖液中，輕輕攪拌孵育 1 小時(shí)。

4. 將一抗稀釋于商品化抗體稀釋液、洗滌緩沖液或封閉緩沖液中。

5. 將印跡膜放入稀釋的一抗溶液中，室溫孵育 1 小時(shí)（或 4°C 過(guò)夜），輕輕攪拌。

6. 使用洗滌緩沖液（含 Tween®-20 表面活性劑的緩沖液（TBST 或 PBST））洗滌印跡膜 3-5 次，每次 5 分鐘。

7. 將二抗稀釋于商品化抗體稀釋液、洗滌緩沖液或封閉緩沖液中。

8. 將印跡膜放入稀釋的酶標(biāo)記二抗溶液中，室溫孵育1小時(shí)。

9. 用洗滌緩沖液洗滌印跡膜3-5次，每次5分鐘。

10. 將印跡膜放入干凈的容器中，并加入相應(yīng)的檢測(cè)試劑。

11. 按照檢測(cè)所用試劑說(shuō)明書(shū)操作，孵育1-5分鐘。

（1） 對(duì)于HRP或AP化學(xué)發(fā)光試劑，將印跡膜暴露于X光膠片或使用成像系統(tǒng)獲取數(shù)字圖像。

（2）對(duì)于顯色檢測(cè)，加入試劑并等待信號(hào)出現(xiàn)。