PMI 1640 培養(yǎng)基，不含酚紅相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨(dú)te的效果，是因?yàn)槠渲泻羞€原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。RPMI 1640 培養(yǎng)基含有生物素、 維生素 B12 以及 PABA，這些成分是 Eagle’s MEM 和DMEM所不具備的。此外，該培養(yǎng)基之中還含有高濃度的維生素肌醇和膽堿。RPMI 1640 培養(yǎng)基不含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或生長(zhǎng)因子。因此，RPMI 1640 培養(yǎng)基需要添加劑，通常采用 10% 胎牛血清 (FBS)。RPMI 1640 培養(yǎng)基使用碳酸氫鈉緩沖體系 (2.0 g/L)，因此需要 5–10% CO2 的環(huán)境來(lái)維持生理 pH 值。

因?yàn)镽PMI1640培養(yǎng)基的特殊環(huán)境，所以在使用時(shí)需要注意以下步驟：

1、使用前

• 從 2–8℃ 取出，恢復(fù)至室溫再用，不要冷液直接加細(xì)胞。

• 檢查：顏色粉紅 / 淡紅、清亮、無(wú)沉淀、無(wú)渾濁。

• 常規(guī)需添加：

• 10% 胎牛血清 FBS

• 1% 雙抗（青霉素 - 鏈霉素）（可選）

• 所有添加都在超凈臺(tái)無(wú)菌操作。

2、培養(yǎng)條件

• 必須在 37℃、5% CO? 培養(yǎng)箱。

• 培養(yǎng)瓶 / 板不要擰太緊，保證氣體交換。

• 顏色變紫：CO? 不足或偏堿。

• 顏色變黃：偏酸，多為細(xì)胞過(guò)密或污染。

3、操作要點(diǎn)

• 換液沿瓶壁緩慢加，不要直沖細(xì)胞。

• 懸浮細(xì)胞可半量換液；貼壁細(xì)胞先棄舊液、PBS 輕洗再加新液。

• 避免劇烈搖晃產(chǎn)生氣泡。

4、污染判斷

• 液體渾濁

• 有絮狀、片狀沉淀

• 異味

• 鏡下有大量細(xì)菌、真菌、運(yùn)動(dòng)小顆粒

5、保存

• 未開(kāi)封：2–8℃ 避光。

• 已加血清 / 雙抗：4℃ 1–2 周內(nèi)用完。

• 嚴(yán)禁反復(fù)凍融、長(zhǎng)期室溫放置。

6、廢棄

• 用過(guò) / 污染的培養(yǎng)基 高壓滅菌后再丟棄，防止污染環(huán)境和其他細(xì)胞株。